Thermo Scientific Pierce 直接 IP 試劑盒使用活化樹脂以共價方式將 IP 抗體（任何物種或類別）固定至瓊脂糖微珠，無需使用蛋白 A/G，從而在無抗體干擾的情況下實現免疫沉淀。

該方法的主要優勢是有機會使用任何物種或亞類的純化抗體（而不僅僅是與蛋白 A 或 G 結合的類型）和能夠在不受抗體污染的情況下純化靶蛋白。使用該方法，還可從血清樣品中免疫沉淀抗原，而不會共純化非靶向免疫球蛋白。最后，該試劑盒使用微量離心杯從微珠狀瓊脂糖樹脂中有效清洗和分離樣品。

直接 IP 試劑盒的特點：

?僅需少于 10 µg 抗體 — 經優化的程序進行單一 IP 實驗時僅需 2 至 10 µg 抗體，不多于傳統 IP 方法需要的抗體量
? 簡單高效的可擴展性 — 僅使用單一免疫沉淀實驗所需的抗體量或固定 100 至 200 µg 抗體即可制備即用型 IP 親和樹脂用于許多實驗
? 極低抗體污染 — 將抗體不可逆地連接至瓊脂糖微珠，從而盡可能減少重鏈和輕鏈與純化蛋白共洗脫（即，低于 5%）
? 使用任何物種和亞類的抗體進行 IP — 使用雞 IgY、人 IgE、小鼠 IgM 或任何其他純化蛋白
? 制備的抗體親和樹脂可重復使用 — 抗體以共價方式固定化，且不會被溫和洗脫程序滅活，因此樹脂通常可重復使用數次
? 便利的樣品處理 — 離心柱（參見尺寸）可消除樹脂損耗并可高效分離溶液
? 全套試劑盒 — 包裝包括細胞裂解緩沖液和足以進行至少 50 次抗體固定和 IP 實驗的試劑和離心柱
? 需要純化抗體 — IP 抗體溶液必須不含 BSA、明膠或其他穩定劑蛋白；如需輕松去除這些蛋白，請參見我們的抗體純化試劑盒（產品編號 44600）

應用：
?隨后通過電泳和蛋白切除進行質譜或測序鑒定分析的免疫沉淀；
?對分子量與重鏈或輕鏈抗體片段相似的靶蛋白進行的免疫沉淀和 SDS-PAGE 分析
?對通過非變性方法（即，不涉及 SDS-PAGE 的方法）進行后續分析的靶蛋白進行的免疫沉淀
?使用未結合至蛋白 A、蛋白 G 或蛋白 A/G 進行的免疫沉淀
?從血清或含免疫球蛋白的其他樣品中進行的免疫沉淀

通過兩個簡單步驟進行直接免疫沉淀：

步驟 1：將抗體連接至瓊脂糖樹脂：直接 IP 方法的步是制備 IP 抗體親和樹脂。在含適當體積 AminoLink Plus 偶聯樹脂（醛活化微珠狀瓊脂糖樹脂）的磷酸鹽緩沖液中孵育純抗體（參見產品優勢）。在孵育過程中，大抗體分子表面上的各種賴氨酸 ε 胺與樹脂上的醛基團發生反應，從而形成席夫堿鍵，然后在存在氰基氫化物的情況下穩定為仲胺鍵。固定化反應（被稱為還原胺化）是一種非變性反應，產生的抗體偶聯效率通常高于 85%，且抗原結合功能損失極小。

步驟 2：進行免疫沉淀實驗：制備后，抗體樹脂可以多份平行等份試液或整體形式進行 IP 實驗。將抗體樹脂與含有目標蛋白抗原的樣品一起孵育，可使抗體:抗原復合物形成。進行洗滌以去除樣品中的非結合（可能不需要）組分后，通過使用試劑盒中提供的洗脫緩沖液從抗體中解離來回收抗原。在微量離心杯中完成整個程序，使得短暫離心后溶液與瓊脂糖樹脂分離。只有通過該程序對抗原進行洗脫，才能在不受抗體片段干擾的情況下識別和進一步分析抗原。此外，抗體樹脂可以重復使用，用于其他輪次的免疫沉淀。

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