免疫組化

可以：（1）惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷；（2）確定轉移性惡性腫瘤的原發(fā)部位；（3）對某類腫瘤進行進一步的病理分型；（4）發(fā)現(xiàn)微小轉移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術范圍的確定。
　　
　　實驗方法原理根據(jù)聚合酶技術把辣根過氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子結合在多聚酶上形成多聚物分子,其與待檢的抗原特異性的結合后，加入底物顯色。
　　
　　實驗材料石蠟切
　　
　　試劑、試劑盒PBS檸檬酸鹽緩沖液蒸餾水增強劑酶標抗鼠兔聚合物蘇木素酒精二甲苯樹膠鹽酸二氨基聯(lián)苯胺
　　
　　儀器、耗材烘箱微波盒塑料切片架顯微鏡膠頭滴管
　　
　　實驗步驟一、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。
　　
　　二、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復的，視具體情況而定）
　　
　　三、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。
　　
　　四、除去PBS液，每張切片加1滴相應的*抗體（相應稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時。
　　
　　五、PBS沖洗3×5’。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強劑，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。
　　
　　六、除去PBS液，每張切片加1滴酶標抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’。
　　
　　七、除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘。
　　
　　八、蘇木素復染，0.1%HCl分化，自來水沖洗，藍化，切片經梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。
　　
　　其他一、特點
　　
　　1.在切片加上一抗后，第二抗體標記多聚螯合物酶（HRP）的復合物與一抗結合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信號有顯著的放大，其敏感性較SABC、SP法高。
　　
　　2.由于多聚物在體內不存在，又不使用*，從而避免了由于*引起的非特異性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。
　　
　　3.辣根過氧化物酶與二抗結合在多聚物上，替代傳統(tǒng)方法的二抗、三抗，減少了實驗步驟，且試劑孵育時間短，只需15分鐘，使得免疫組化方法更簡單，實驗時間比SABC、SP法大為縮短。
　　
　　詳情請看：免疫組化