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實驗操手講解我司ELISA試劑盒操流程,您沒見過吧,本章就由我司一個客戶朋友親身講講他自己的實驗經歷。讓我們一起閱讀!
給我們新同事說說ELISA基本步驟。與其寫個文檔,不如直接寫帖子,反正工作量一樣。我自己做ELISA也只是初學者,所以說得不對的地方,請大家多多指正。
ELISA有白底(上圖,不可拆)和黑空板子(可拆,8個一排,12排)。用吸光度(一般是450nm的OD值)來檢測,就只能用白底的板子。黑底的板子可以用Lumin讀數。
第二步:用100ul包被抗體,包被好板子之后,輕彈混勻。將封蓋膜的白色撕去,用透明有粘性的膜,貼在板子上,把膜壓緊(貼膜是為了防止液體揮發,所以一定要把每孔黏牢),室溫孵育過夜。
ELISA試劑盒注意事項:
1.如果一次只做一部分孔,貼膜可以剪刀剪開,只用一部分。保證膜可以把加液后的孔蓋住就可以。
2.加樣時候,一定要保證每孔加樣量*一樣。避免因為操作原因,每孔液體量有區別。ELISA比較敏感,操作誤差會導致zui后讀數有不小的差別。
3.加的樣,保證樣品加在孔底,不要粘在管壁上,減少孔與孔之間的差異。
第二天早上,來洗掉包被液。
ELISA試劑盒標準品稀釋步驟:
取7個EP管,第1管放400ul緩沖液,第2到7管放200ul緩沖液。將1.5ul標準品加入到管中,200ul槍輕輕吹打混勻。從第1管中取200ul加入第2管中,吹打均勻。依次稀釋。第7管有400ul液體,zui后只用200ul。
標準品加樣步驟:
從第1管中取100ul加到A1孔,再100ul加到A2復孔中。
第2到7孔,參考上述步驟。
第8孔,H1和H2加沒有標準品的緩沖液,作為陰性對照。
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