免疫測定技能的根底在于抗原抗體之間的特異結合反響，所以任何的診斷試劑離不開的質料，如抗原抗體，酶等。曾經用于免疫測定的抗原一般為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后取得的多克隆抗體和運用雜交瘤技能得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的符號物如酶標結合物則經過各種化學合成辦法制備。近年來，跟著分子生物學的發展，運用基因工程辦法制備各種特別的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型運用的測定辦法也不斷出現。
包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，調查陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1～10μg/ml。
 酶符號抗體工作濃度的挑選：首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定（見酶符號抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度）在正式試驗體系里準確地滴定其工作濃度。
酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選要求是價廉、安全、有明顯地顯色反響，而自身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果，應留意防護。有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現在較為滿意的供氫體。底物效果一段時刻后，應參加強酸或強堿以終止反響。一般底物效果時刻，以10-30分鐘為宜。底物運用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參加。