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氮代謝系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)測試盒

參  考  價:面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號100管/96樣

品牌

廠商性質經銷商

所在地上海市

更新時間:2022-08-01 08:45:41瀏覽次數:640次

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品牌 紀寧生物 貨期 現貨供應
有效期 6個月 用途 僅供科研實驗使用
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氮代謝系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)測試盒

測定方法:微量法

產品規格:100管/96樣

注    意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

GOGAT廣泛分布于植物中,和谷-氨酰胺合成酶共同構成GS/GOGAT循環,參與氨同化的調控。

氮代謝系列_谷-氨酸合成酶(GOGAT)測試盒

測定原理:

GOGAT催化谷-氨酰胺的氨基轉移到α-酮戊二酸,形成兩分子的谷-氨酸;同時NADH氧化生成NAD+,340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;

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粗酶液提取:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

(1)在試劑二中加入9mL試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min;

現配現用(配好后3h內用完);

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二,混勻,立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。

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