糖異生/果糖16二磷酸酯酶FBP測試盒_分光法
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
果糖-1,6二磷酸酶又稱果糖1,6二磷酸酯酶，催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機(jī)磷，在糖的異生代謝和光合作用同化物蔗糖的合成中起關(guān)鍵性的作用。
糖異生/果糖16二磷酸酯酶FBP測試盒_分光法
測定原理：
FBP催化1,6二磷酸果糖和水生成6磷酸果糖和無機(jī)磷，在反應(yīng)體系中添加的磷酸葡萄糖異構(gòu)酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下測定NADPH增加速率，即可計(jì)算FBP活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶， 4℃保存；
樣本的前處理：
①總FBP酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液。
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