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技術文章

單純皰疹Ⅱ型抗體IgM(HSVⅡAb-IgM)檢測

閱讀:741發布時間:2010-11-10

[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 在微孔表面包被純化的HSV抗原。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在HSV—ⅡAb—IgM可與微孔上抗原相結合。然后洗去未結合物質,再加入酶聯液,與抗原抗體復合物結合。洗去過量的酶聯液。zui后加入底物和色原(顯色液)。在特定時間終止酶聯液的催化反應。所產生的顏色強度與標本中HSV—ⅡAb-IgM含量呈正相關。通過酶標儀與校正和對照相比,讀出結果。
[標本準備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.HRP-抗人IgM酶結合物
4.陰性對照
5.陽性對照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。
[測定步驟)
1.吸取10ul血清標本加入250,ul標本稀釋液中,做1:26稀釋。
2.吸取100ul稀釋過的血清、陽性對照、陰性對照和校正液(不稀釋),加入微孔板內,設空白對照l孔。振蕩,混勻,去除孔內液體中氣泡,室溫環境中孵育20min。
3.棄去孔內液體,用洗滌液洗5次。
4.每孔再加入100iA酶聯結合物,室溫環境中孵育20min。
5.棄去孔中酶聯液,用洗滌液洗5次。
6.每孔加入100ul TMB顯色液,室溫環境中孵育10min。
7.每孔加入100ul終止液,終止反應,充分混勻。
8.用酶標儀(波長為450nm)讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性。
[注意事項]
1.整個檢測過程應符合實驗室質量手冊和生物安全守則規定,嚴防交叉污染。
2.所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
3.試劑應保存于2—8℃冰箱,使用前應在室溫環境中平衡30min。
4.洗滌時各孔均應加滿洗滌液,防止孔內有游離酶未洗凈,每次洗板后均應在吸水紙上扣干。
5.血標本應分離出血清保存,2—8C可保存7d,冷凍保存可至6個月,避免反復凍融。
6.試劑在儲存或使用過程中,禁止過熱、
 


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