酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA ）
摘要：
免疫酶聯(lián)吸收試驗（ ELISA ）于 1971 年分別由瑞典學(xué)者 Engrall 和 Perlmann 、荷蘭學(xué)者 Van Weeman 和 Schuurs 報道。其基本原理是把抗原或抗體在不損壞其免疫活性的條件下預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面；測定時，將受檢樣品（含待側(cè)抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體起反應(yīng)形成抗原或抗體復(fù)合物；反應(yīng)終止時，固相載體上酶標抗原或抗體被結(jié)合

相關(guān)專題ELISA免疫實驗技術(shù)
免疫酶聯(lián)吸收試驗( elisa )于 1971 年分別由瑞典學(xué)者 Engrall 和 Perlmann 、荷蘭學(xué)者 Van Weeman 和 Schuurs 報道。其基本原理是把抗原或抗體在不損壞其免疫活性的條件下預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面;測定時，將受檢樣品(含待側(cè)抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體起反應(yīng)形成抗原或抗體復(fù)合物;反應(yīng)終止時，固相載體上酶標抗原或抗體被結(jié)合量(免疫復(fù)合物)即與標本中待檢抗體或抗原的量成一定比例;經(jīng)洗滌去除反應(yīng)液中其他物質(zhì)，加入酶反應(yīng)底物后，底物即被固相載體上的酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，zui后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物即可確定樣品中抗原或抗體含量。間接免疫酶聯(lián)吸收是測定抗體zui常用的方法，其原理是將抗原聯(lián)接到固相載體上，樣品中待檢抗體與之結(jié)合成固相抗原 - 受檢抗體復(fù)合物，再用酶標二抗與固相免疫復(fù)合物中的抗體結(jié)合，形成固相抗原 - 受檢抗體 - 酶標二抗復(fù)合物，測定加底物后的顯色程度，對待檢抗體進行定性或定量測定(圖 7-1 )。
【材料】
1. 抗原：艾特利根瘤菌( Rhizobium etli )菌懸液(見實驗三);
一抗：兔抗艾特利血清(見實驗三)，二抗： 辣根過氧化物酶( Horseradish Peroxidanse ， HRP )標記羊抗兔免疫球蛋白( IgG )(購自中國軍事醫(yī)學(xué)*)。
2. 0.015M 、 pH 7.4 PBS ， 鄰苯二胺( OPD )泡騰片溶液， 2mol/LH2SO4 。
3. 酶標板。
【方法】
1. 包被：將菌懸液放入 96 孔聚乙烯酶標板孔內(nèi)，并加入生理鹽水 100 m l ，酶標板置濕盒中 4 ℃ 過夜，第二天取出，用 PBS (配方見附錄)洗滌 3-4 次后用封口膜封存， 4 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆?。設(shè)置陰性對照孔，孔內(nèi)只加生理鹽水。
2.與一抗反應(yīng)：在樣品孔和對照孔內(nèi)加 1 ： 4000 一抗 100 m l ，置濕盒 37 ℃ 保溫 1h ，傾去液體，用 PBS 洗滌 3-4 次。
3.與二抗反應(yīng)：在樣品孔和對照孔內(nèi)加 1 ： 4000 羊抗兔 IgG 100 m l ，置濕盒 37 ℃ 保溫 3h ，傾去液體，用 PBS 洗滌 3-4 次。
4.顯色反應(yīng)：在樣品孔和對照孔內(nèi)加 H 2 O 2 溶解的 鄰苯二胺( OPD )泡騰片溶液 100 m l ，在暗處避光顯色 20min ，加入 2mol/LH 2 SO 4 終止反應(yīng)。
【結(jié)果判定】
陰性對照孔為淡黃色，加入一抗的孔呈橙色，為陽性反應(yīng)(圖 7-2 )。
【注意事項】
• 報被時間不少于 18 小時。
• 報被和溫育應(yīng)將固相載體放在濕盒內(nèi)進行。
• 洗板一定力求干凈，以保證實驗成功。