培養基EB細胞體外分化胚狀體形成的特點

使用細菌培養基皿去除LIF后胚狀體的形成需要4天。

　　1．分散純化細胞（參見上面的細胞傳代部分）

　　2．純化2小時后將細胞轉入含有ES培養基的50ml Falcon管中，計數細胞取適量體積放入15ml管中離心3分鐘。

　　3．用2mlEB培養基重懸細胞，吹打至少10次制成單細胞懸液

　　4．一個15cm的細菌培養皿接種4～5×106個細胞（1個*融合的組織培養皿通常足以接種4個同樣規格的細菌培養皿）。

Anti-Phospho-PDGF Receptor alpha(Tyr849)/PDGF Receptor beta (Tyr857)  磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml
Anti-PDGF Receptor beta/PDGF-R-B  血小板源性生長因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009)  磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr1021)  磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr740)  磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr751)  磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml
Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771)  磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體    Multi-class antibodies    規格：     0.1ml

　　5．2天后更換培養基

　　將胚狀體轉入錐形管中放置3～5分鐘使細胞沉降。棄去上清，將細胞重懸于新鮮培養基并接種在新的細菌培養皿中。

　　6．用EB培養基培養的第4天將細胞轉入沒有包被的組織培養皿中（這即是細胞的移植步驟）。1個組織培養皿之中放置1個細菌培養皿，在進行第3步之前一天將胚狀體黏附在同樣規格的培養板上。

　　形成胚狀體需要4天時間。在EB培養基中再培養1天使胚狀體粘附在組織培養皿的表面。這一天被認為是第2步和第3步的分界。