經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

    經(jīng)過一段時(shí)間的瀏覽和學(xué)習(xí)，從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請(qǐng)教，并結(jié)合實(shí)踐操作，我經(jīng)歷了初級(jí)——查找資料和摸索方法；中級(jí)——問題求助和不斷總結(jié)；——難題解答和經(jīng)驗(yàn)分享這三個(gè)階段，也學(xué)到了不少知識(shí)，積累了很多寶貴經(jīng)驗(yàn)，與大家一起分享下。

實(shí)驗(yàn)為例

    從我接觸的很多本科生和研究生中發(fā)現(xiàn)，他們的確是免疫組化“新手"，他們只注重如何做和zui終的結(jié)果，但對(duì)為什么這樣做不太感興趣。他們常按照網(wǎng)上所說的方法，摸索好的抗體濃度和條件后做出很漂亮的染色結(jié)果后，他們就認(rèn)為自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法了，結(jié)果不求上進(jìn)，更換一種新抗體后或?qū)嶒?yàn)出現(xiàn)異常結(jié)果后就很難做出來了。當(dāng)然，免疫組化對(duì)于我來說，做過很多，但也不能說什么都會(huì)，只不過我做的多了，失敗多了和思考多了，可能比新手多了解一些其中的訣竅，拿來與大家進(jìn)行分享。此外，我個(gè)人經(jīng)驗(yàn)不可能面面俱到，還需要更多有經(jīng)驗(yàn)的高手一起分享、糾正和補(bǔ)充。在這里，我需要感謝中華病理網(wǎng)、丁香通、小木蟲論壇給我很大的幫助，還有上海舜田生物技術(shù)人員老師給我實(shí)驗(yàn)很多指導(dǎo)和幫助，讓我受益匪淺。

免疫個(gè)人感悟

    1、其實(shí)免疫組化，我個(gè)人感覺方法和操作都不是很難，關(guān)鍵是結(jié)果出現(xiàn)異常時(shí)該如何去解決？我認(rèn)為首先需要掌握好免疫組化實(shí)驗(yàn)的原理，知道每一個(gè)操作步驟的目的，這樣你才能大膽地去改革和糾正一些錯(cuò)誤的步驟，如抗體孵育條件主要是抗體濃度、溫度、時(shí)間，這三者一般是相互成反比的（相對(duì)），其中濃度是zui重要的先決條件，溫度決定反應(yīng)的速度、時(shí)間決定反應(yīng)的量。比如溫度有4℃、室溫、37℃。我推薦4℃*，反應(yīng)zui溫和，背景較淺；而37℃反應(yīng)速度較快，時(shí)間較短；室溫我不太提倡，除非你每次都把環(huán)境溫度控制在一定的范圍，否則，盡量選擇前兩者。

    2、定位和定性是免疫組化zui大的優(yōu)勢(shì)。相比于其他蛋白檢測(cè)方法，免疫組化具有定位較直接準(zhǔn)確、定性靈敏度高，是定位檢測(cè)分析方法。尤其對(duì)于有些因子的轉(zhuǎn)位研究十分有用。

    3、免疫組化結(jié)果定量分析的前提是高質(zhì)量的染色切片。免疫組化結(jié)果也能定量分析，但必須是背景染色淺而特異性染色較深的情況下，分析zui為準(zhǔn)確，這種原則可能也是我們?nèi)粘徃鍟r(shí)判定研究結(jié)果的*條件。

    4、免疫組化實(shí)驗(yàn)一定要設(shè)置陽性和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照一般是用肯定表達(dá)這種抗原的切片來做；陰性對(duì)照一般是用PBS或非一抗替代一抗來進(jìn)行反應(yīng)，其余步驟均一致。前者是排除方法和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有無問題；后者是排除有無一抗外的非特異性染色。

    5、免疫組化技術(shù)掌握與否的鑒定標(biāo)準(zhǔn)是同一切片或不同切片中不同抗原均從摸索濃度或條件而做出優(yōu)良的染色切片。我發(fā)現(xiàn)許多研究生把網(wǎng)上或者說明書摸索的反應(yīng)條件、濃度、方法步驟，重復(fù)運(yùn)用于同一性質(zhì)的切片和同一種抗體，做出來后就覺得自己已經(jīng)掌握了免疫組化方法，更換一種抗體后，居然連二抗的種屬來源都拿錯(cuò)了。失敗往往促進(jìn)你去思考試驗(yàn)原理和過程，成功有時(shí)也讓自己很自傲。

    6、免疫組化的應(yīng)用廣泛，是當(dāng)前實(shí)驗(yàn)研究的zui重要方法之一。如今發(fā)SCI論文時(shí)，明顯感覺僅靠量化的數(shù)據(jù)來發(fā)文章很難，加一些形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)或圖片，老外十分歡迎，可能是怕你學(xué)術(shù)造假吧。當(dāng)然也不能做假陽性或假陰性結(jié)果。

    7、實(shí)驗(yàn)方法需要?jiǎng)邮趾蛣?dòng)腦。經(jīng)過了反復(fù)的動(dòng)手和動(dòng)腦，把理論原理運(yùn)用于實(shí)踐，在把實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)的問題帶到理論知識(shí)中去解決，zui終把理論與實(shí)踐融會(huì)貫通。必要時(shí)去各大論壇或者一些公司尋求幫助，個(gè)人感覺上海舜田生物不錯(cuò)，服務(wù)質(zhì)量也很好。