免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)又稱免疫細胞化學(xué)(immunocytochemistry),是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng),對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項技術(shù)。
1.基本原理
抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以其達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性,定位或定量的研究。
2.幾種常用的免疫組織化學(xué)方法的原理
免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)
將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
免疫酶細胞化學(xué)
是目前免疫組織化學(xué)研究中zui常用的技術(shù).基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進行定位或定性研究.
免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究.
免疫組織化學(xué)的全過程包括:①抗原的提取與純化;③免疫動物或細胞融合,制備特異性抗體以及抗體的純化;③將顯色劑與抗體結(jié)合形成標記抗體;④標本的制備;③免疫細胞化學(xué)反應(yīng)以及呈色反應(yīng);⑧觀察結(jié)果。