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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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所 在 地上海市
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更新時間：2018-05-24 12:40:50瀏覽次數(shù)：272次
聯(lián)系我時，請告知來自 環(huán)保在線A549/DDP人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株這株細(xì)胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細(xì)胞耐藥亞株。
英文名稱：Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains
1） 來源：肺癌
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者
A549/DDP人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株
英文名稱：Human Non - small cell lung cancer cell Resistant Sub - strains
規(guī)格：1*10 6
細(xì)胞介紹
這株細(xì)胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細(xì)胞耐藥亞株。
一、細(xì)胞特性
1） 來源：肺癌
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
二、細(xì)胞收到后處理
A549/DDP人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞耐藥亞株在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？
（1）細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
★ 注：如運輸過程中導(dǎo)致細(xì)胞污染或者死亡，我們將無條件補(bǔ)發(fā) 收貨后十個工作日內(nèi)有其他問題提供照片可半價重發(fā)。
相關(guān)細(xì)胞系列表：
人乳腺癌細(xì)胞（上皮粘性蛋白基因修飾）；Ecad231-9 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
人乳腺癌細(xì)胞（紅色熒光蛋白標(biāo)記）；MDA-MB-231-Red3 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
人骨肉瘤細(xì)胞；HOS 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
綠色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞；HCT116-GFP 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
犬腎細(xì)胞；MDCK/IgR 犬 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（HNP抗性）；HNPMEF(CF-1) 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
正常大鼠腎細(xì)胞；NRK 大鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞（綠色熒光蛋白標(biāo)記）；MFC-B5-GFP 小鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
正常大鼠腎細(xì)胞（EGF受體陽性）；NRK49F 大鼠源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
人結(jié)腸癌細(xì)胞；NCI-H508 人源 1×10^6 細(xì)胞數(shù)/ml
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