目的：學(xué)習(xí)利用細(xì)菌檢測基因突變的方法 
Ames試驗 即鼠傷營養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變試驗，是目前檢測基因突變zui常用方法之一。 
原理：利用鼠傷突變株，即缺陷型，其原始菌株菌體內(nèi)的是通過自身一系列酶催化反應(yīng)合成的，這種能自身合成所需營養(yǎng)成份的菌株叫做野生型菌株。本試驗用鼠傷為突變株，其不能合成，而必須由外界提供這種菌珠被稱為營養(yǎng)缺陷式營養(yǎng)實變型（his-）。當(dāng)誘變劑作用于菌株后，在菌株遺傳物質(zhì)的特定位點發(fā)生基因回復(fù)突變成為野生型（his+），故在缺乏的培養(yǎng)基上，只存少數(shù)自發(fā)回變菌落生長，而能誘發(fā)細(xì)菌回變的致突變物可使細(xì)菌生長增多，從而可判斷被藥物是否具有致實變性。 
材料：菌株，鼠傷TA97，TA98，TA100，TA102。 
器材：恒溫培養(yǎng)箱，干燥箱，高壓消毒鍋，水溶鍋，紫外線燈（15w），藥物天平，分析天平 酒精燈，濾紙片，平皿，試管，燒杯，吸管。 
培養(yǎng)基配制 
1．Vogel-Bonner液10×（VB液10倍濃縮）用于配制底層基本培養(yǎng)基。配制方法：（MgSO4·7H2O）1g，檸檬酸（C6H8O7·H2O）10g，（K2HPO4·3H2O）65.5g，磷酸氫銨鈉（NaNH4HPO4·4H2O）17.5g。將上述成分依次用蒸餾水溶解、混勻，然后加蒸餾水至500ml，置4℃冰箱保存。 
2．底層基本培養(yǎng)基 取VB液（10倍）100ml，加入蒸餾水800ml，用1mol/L NaOH調(diào)pH至7.0，然后加入瓊脂12—15g，經(jīng)121℃20分鐘高壓滅菌。待冷至800C左右時，加入100ml已經(jīng)112℃20分鐘高壓滅菌的20%葡萄糖液，混勻后澆制平板。 
3．上層培養(yǎng)基 D-12.4mg，L-鹽酸9.5mg，NaCl5g，瓊脂6g，上述成分依次加熱溶解，混合，然后加蒸餾水至1000ml。分裝后經(jīng)121℃15分鐘高壓滅菌備用。 
方法 
1．藥物的劑量選擇 
對于易溶解的藥物，實驗zui高劑量可采用抑菌濃度下的zui大劑量，或以zui大溶解度為zui高劑量和5mg/皿為zui高劑量，下設(shè)5個劑量，（即5000，500，50，5，0.5，0.1μg/皿）。溶劑：藥物是水溶性，可用滅菌蒸餾水，如非水溶性可選二甲亞砜為溶劑。 
2．平板摻入法 
每皿加底層培養(yǎng)20～25ml，待凝固。取融化并保溫于45℃的上層培養(yǎng)基，分裝于5ml試管中，每支試管2ml，依次加入新鮮菌液0.1ml， 藥物0.1ml，需加S9時則加入S9混合液0.3ml，混勻，迅速倒在底層培養(yǎng)基上，使之分布均勻。待上層瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板置37℃培養(yǎng)48小時后，觀察結(jié)果。
結(jié)果評價
觀察結(jié)果時，首先應(yīng)觀察各實驗組和陰性對照的背景菌苔的生長情況。在肯定背景菌苔與陰性對照相差不多后，再比較各劑量組的回變菌落數(shù)。若回變菌落數(shù)的出現(xiàn)有劑量反應(yīng)關(guān)系，回變菌落數(shù)大于自發(fā)對照的2倍或以上，結(jié)果并具有重現(xiàn)性，并有統(tǒng)計學(xué)意義的增加，可判斷為陽性，反之為陰性。