EGY48  Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品規(guī)格

EGY48：                      10×100μl            保存條件：-80℃

PGBKT7（control vector）：10ng/μl    10μl            保存條件：  4℃

Carrier DNA：             5ug/μl  100 μl            保存條件：  4℃

PEG/liAC：                        5 ml            保存條件：  4℃

基因型

 MATα, ura3, his3, trp1, LexA_{op (x6)}-LEU2

產(chǎn)品說(shuō)明

 EGY48感受態(tài)細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)室常用酵母雙雜用菌株，MATα型，可轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或mating操作。Transformation  marker為: his3, trp1, ura3 ，報(bào)告基因?yàn)椋?/span>LEU2 。經(jīng)PGBKT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率為10⁴cfu/μg DNA。

操作方法

1. 取100 μl冰上融化的EGY48感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-5ug，Carrier DNA（95-100度5min,快速冰浴，重復(fù)一次）10 ul ，PEG/liAC  500ul并吸打幾次混勻，30度水浴30 分鐘（15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。

2. 將管放42度水浴15min  （7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。  

3. 5000 rpm 離心 40s 棄上清，ddH2O 400ul 重懸，離心 30s 棄上清。                      

4. ddH2O 50ul重懸，涂板。

5. 28-30度 ，培養(yǎng)48-96小時(shí)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。