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南京森貝伽生物科技有限公司

森貝伽帶您詳細(xì)了解葡聚糖凝膠

時間:2017-11-28閱讀:198
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葡聚糖凝膠是一種具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物,它是由葡聚糖加入交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷通過醚鍵互相交聯(lián)聚合而成的,交聯(lián)度越大,網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越緊密,吸水后的體積膨脹就越小,能允許進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子的分子量也就越小,反之亦然。層析時,大于凝膠孔徑的大分子,被阻于凝膠相外,沿著凝膠顆粒之間的間隙走,下移速度zui快,故zui先洗脫下來,中分子物質(zhì)部份進(jìn)入凝膠內(nèi)部,洗脫速度為其次,而小分子物質(zhì)因全部進(jìn)入凝膠,受到阻力zui大,故zui后被洗脫下來,如此物質(zhì)得到分離。

2. 產(chǎn)品特性(以g-25為例)

2.1 化學(xué)和物理性質(zhì)

葡聚糖凝膠G-25是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。型號G表明每克于凝膠吸水量的多少,G-25表明每克干凝脫膠吸水2.5毫升。這表征了凝膠所能膨脹的倍數(shù),亦間接表征了凝膠孔徑的大小。 葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

2.2 化學(xué)穩(wěn)定性

    葡聚糖凝膠G-25不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解)。它在水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。*接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應(yīng)避免使用。

2.3 物理穩(wěn)定性

    葡聚糖凝膠G-25并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。

3 G-25使用操作方法

3.1 乙醇浸泡

在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用去離子水洗去殘存的乙醇濾干。

3.2 去離子水浸泡

室溫下,在去離子水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹。

3.3 鹽酸浸泡

在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗至中性。

3.4 裝柱

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

3.5 平衡

上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)

3.6 上樣

凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50 cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可。

3.7 洗脫方法

可以用去離子水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化。

3.8 在位清洗(CIP)

凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

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