鴨霍亂抗體（PM Ab）ELISA檢測試劑盒使用說明書

【資料簡介】

鴨霍亂抗體（PM Ab）ELISA檢測試劑盒檢測原理
試劑盒采用雙位點一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被鴨霍亂（PM）純化抗原的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗原，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鴨霍亂抗體（PM Ab）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），判斷樣品是否含有鴨霍亂抗體（PM Ab）。
樣品收集、處理及保存方法
.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.  細胞上清液：3000轉離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心0分鐘取上清。
5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
酶標儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
37℃恒溫箱
操作注意事項
  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
  預處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。
  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑的準備
 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份的20×洗滌緩沖液加9份的蒸餾水。
洗板方法
  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡min，洗板5次。
鴨霍亂抗體（PM Ab）ELISA檢測試劑盒操作步驟
  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；
  待測樣本孔先加待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL；
  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原00μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。
  每孔加入終止液50μL，5min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結果判斷
 .  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥.00；
                陰性對照孔OD值平均值≤0.2。
2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.2
3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性
試劑盒性能
.  準確性：陽性對照孔OD值平均值≥.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.5，說明試驗結果有效。
2.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
3.  重復性：板內、板間變異系數均小于5%。
4.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5.  有效期：6個月
免責聲明
.  鴨霍亂抗體（PM Ab）ELISA檢測試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。