總抗氧化能力試劑盒說明書

【資料簡介】

總抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
試劑盒說明書
總抗氧化能力（Total antioxidant capacity ，T-AOC）
試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫(yī)學和藥學研究
中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液
及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測定原理
在酸性環(huán)境下，物質(zhì)還原 Fe
3+ -三吡啶三吖嗪(Fe 3+ -TPTZ)產(chǎn)生藍色的 Fe 2+ -TPTZ 的能力反映
了其總抗氧化能力。
自備實驗用品
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預冷。
試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 5mL×1 瓶，避光保存。
樣品的制備
(1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品
血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心
10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超 30 d）
后再測定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入
1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
(3) 細胞樣品
按照細胞數(shù)量（10
4 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞
加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；10000g，
4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
操作步驟
混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，使用前預溫至 37℃ 。
空白管 測定管
混合液（μL） 900 900
樣品（μL） 30
雙蒸水（μL） 120 90
充分混勻，反應 10min，雙蒸水調(diào)零，1mL 玻璃比色皿，測定 593nm 處吸光值，△A= A 測定
-A 空白