蛋白質(zhì)染色中常用染色液分析

【資料簡介】

蛋白質(zhì)染色中常用染色液分析

染色液種類繁多，各種染色液染色原理不同，靈敏度各異。使用時可根據(jù)需要加以選擇。常用的染色液有：

1．氨基黑10B(amino black 10B又稱為amidoschwarz 10B或naphthalene blueblack，2B 200)氨基黑10B分子式為C22H13N6S3Na3，MW=715，λmax=620-630nm，是酸性染料。其磺酸基與蛋白質(zhì)反應構成復合鹽，是zui常用的蛋白質(zhì)染料之一，但對SDS-蛋白質(zhì)染色效果不好。另外，氨基黑10B染不同蛋白質(zhì)時，著色度不等、色調(diào)不一(有藍、黑、棕等)；作同一凝膠柱的掃描時，誤差較大。

2．考馬斯亮藍R250(coomassie brilliant blue R250，簡稱CBBR250或PAGE blue83)

考馬斯亮藍R250的分子式為C14H44O7H3S2Na，MW=824，λmax=560-590nm。染色靈敏度比氨基黑高5倍。該染料是通過范德瓦爾鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合，尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色，但蛋白質(zhì)濃度超過一定范圍時，對高濃度蛋白質(zhì)染色不合乎Beer定律，作定量分析時要注意這點。

3．考馬斯亮藍G250(簡稱CBBＧ250或PAGE blue G90，又名xylene brilliant cyanin G)

考馬斯亮藍G250比CBB R250多二個甲基。MW=854，λmax=590-610nm。染色靈敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。其優(yōu)點是在三氯乙酸中不溶而成膠體，能選擇地使蛋白質(zhì)染色而幾乎無本底色，所以常用于重復性好和穩(wěn)定的染色，適于作定量分析。

4．銀染色法

此法是Switzer.R.C和Merril.CR首先提出的，它較CBB R250靈敏100倍。但染色機制

尚不清楚，可能與攝影過程Ag+的還原相似。其靈敏度很高，牛血清為4×10-5μg/mm2，即清蛋白為8×10-5μg/mm2，cyt C為1.7×10-4μg/mm2，因此也常用于凝膠電泳蛋白質(zhì)染色。

上海勁馬生物表示經(jīng)醋酸纖維、瓊脂(糖)、聚丙烯酰胺電泳分離的各種生物分子需用染色法使其在支持物相應位置上顯示出譜帶，從而檢測其純度、含量及生物活性。蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、核酸及酶等均有不同的染色方法