人（Human）乙型肝炎表面抗原ELISA檢測試劑盒操作方法

【資料簡介】

試驗原理：

        HBSAG試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知HBSAG濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將HBSAG和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中HBSAG的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制：

試劑盒成份	96孔配置	48孔配置
96/48人份酶標(biāo)板	1塊板（96T）	半塊板（48T）
塑料膜板蓋	1塊	半塊
標(biāo)準(zhǔn)品：500pg/ml	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
空白對照	1瓶（1.0ml）	1瓶（0.5ml）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
*標(biāo)記的抗HBSAG抗體	1瓶（8.0ml）	1瓶（4.0ml）
親和鏈酶素-HRP	1瓶（12ml）	1瓶（5ml）
洗滌緩沖液	1瓶（20ml）	1瓶（10ml）
底物A	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
底物B	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）
終止液	1瓶（6.0ml）	1瓶（3.0ml）

操作注意事項：

●   試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

●   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

●   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

●   使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

●   使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

●   底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

●   加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

●   按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

操作步驟：

1.    使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.    根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.    加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4.    甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5.    每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6.    甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7.    每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.    取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.    在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析：

1.   儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2.   以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的HBSAG標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的HBSAG含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3.   檢測值范圍： 0-500pg/ml
4.   敏感度：1.95pg/ml