農(nóng)桿菌濃度

【資料簡介】

    在實(shí)驗(yàn)室已初步建立的農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)銀耳轉(zhuǎn)基因方法的基礎(chǔ)上，以銀菌株Tr21-01為出發(fā)菌株，通過凍融法將攜帶有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)基由于遺傳標(biāo)記及人胰島素基因(BAC)為目的基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，并進(jìn)一步介導(dǎo)轉(zhuǎn)究。實(shí)驗(yàn)結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率；GV3101轉(zhuǎn)化率較低，且假陽性較高；LBA4404無抗性菌落長出。此結(jié)果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢能力具有差異性，且對受體侵染具有一定的特異性。

   本實(shí)驗(yàn)以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株，對農(nóng)桿菌AGL-1介導(dǎo)轉(zhuǎn)化銀耳進(jìn)行研究。基于農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因受諸多因素的影響，本實(shí)驗(yàn)從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培養(yǎng)時(shí)間、銀耳芽孢濃度、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮(AS)的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進(jìn)行優(yōu)化。其轉(zhuǎn)化前提優(yōu)化結(jié)果為：AGL-1菌液OD值為0.4～0.5，AS誘導(dǎo)培養(yǎng)濃度為250μg/mL、共培養(yǎng)濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL，共培養(yǎng)72h轉(zhuǎn)化率zui高，可達(dá)500個(gè)/10~8，且陽性菌落為89%；EHA105菌液OD值為0.4～0.5。