士鋒動物肝臟中DNA的制備

【資料簡介】

一、實驗目的：
學習并掌握動物組織總dna的提取方法及其原理。

二、實驗原理:
要獲得純的DNA樣品，必須考慮以下幾點：
??如何選材，如何破碎組織細胞？
??如何除去蛋白質？在真核細胞內，DNA與蛋白質結合成核蛋白的形式存在。因此，分離DNA時必須使其與蛋白質解離，并除去蛋白質。
??設法除去RNA的污染；
??防止dna酶的降解作用；

(一)選材
要提取動物組織DNA，一般選擇細胞膜較脆弱，容易破碎的動物臟器，如胸腺、肝臟、脾臟、胰臟、精子等。

(二)細胞破碎方法—機械物理法：
•研磨：將剪碎的動物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿，破碎細胞。這種方法溫和，適合實驗室使用。
•組織搗碎器：較劇烈的破碎細胞的方法，為了防止發熱和升溫過高，通常是轉10秒—20秒，停10秒—20秒，可反復多次。
•壓榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高壓下使幾十毫升的細胞懸液通過一個小孔突然釋放至常壓，細胞將*破碎。溫和的、*破碎細胞的方法，但儀器費用較高。(少量細少量細胞可用French press,大量可用Manto-gaulin
•反復凍融法：將待破碎的細胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室溫(或40℃)迅速融化，由于細胞內形成冰粒使剩余胞液的鹽濃度增高而引起細胞溶脹破碎。
•超聲波處理法：借助超聲波的振動力破碎細胞壁和細胞器。使用時注意降溫，防止過熱。
•冷熱交替法：在90℃左右維持數分鐘，立即放入冰浴中使之冷卻，如此反復多次，絕大部分細胞可以被破碎。
組織搗碎勻漿機