詳細介紹ELISA法檢測肺炎衣原體

[檢測方法] ELISA法

肺炎衣原體感染廣泛存在于*，以隱性感染為主。其臨床表現多樣，主要引起人非典型肺炎，還可引起咽炎、支氣管炎、虹膜炎、肝炎、心內膜炎及結節性紅斑等，亦是艾滋病、白血病等疾病繼發感染的重要病原，且與冠心病的發生相關，嚴重威脅人類健康。常見檢查方法為ELISA法檢測肺炎衣原體抗體。
[實驗原理] 
采用ELISA法，血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中，使之發生反應，然后去除未結合的抗體，加入結合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結合的抗體反應，結合的HRP與發色底物發生顏色反應。zui后，終止底物反應，在酶標儀上讀出光密度值。
[標本準備] 
肺炎衣原體取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內不能進行試驗，分離血清后將其保存于一20℃環境中。檢測時，使樣本恢復至室溫。
[試劑]
1．預包被微孔板
2．陽性對照
3．弱陽性對照
4。陰性對照
5．標本稀釋液
6，濃縮酶聯物
7，底物A、B
8．終止液
[儀器]
酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。

[正常參考值] 肺炎衣原體抗體陰性
[實驗步驟]
1．配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內可置室溫環境中，長期可存于2—8℃環境中。
2．配制酶聯物 按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯物加酶聯物稀釋液1 000ul（根據檢測標本數量確定稀釋量），未用完的丟棄。
3．待試劑盒平衡至室溫后，待測標本按1；51稀釋，即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。
4．將稀釋標本置37℃環境中20min。
5。各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中，空白對照孔加100u1標本稀釋液，蓋好反應板，置37℃環境中30min。
6。甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。
7．每孔加酶聯物100~1，蓋好反應板，置37℃環境中30min。
8．甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。
9．加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環境中15min。
10．取出，加終止液1滴，用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結果。

[注意事項]
1．本實驗結果須結合臨床表現、病史作出診斷后，方可采取適當臨床處理。
2。試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質，但仍可能有少量標本難以除盡干擾。因此，如某標本多項IgM均為陽性，應考慮RF的干擾。
[臨床意義]肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體主要引起呼吸系統感染。肺炎衣原體抗體的檢測主要用于肺炎衣原體肺炎的輔助診斷和肺炎衣原體感染的流行病學調查。肺炎衣原體抗體在健康成人中的陽性率約25％～50％，而兒童陽性率低于成人。
肺炎衣原體[結果判斷）
1．陰性對照平均OD值須小于0．20。
2．弱陽性對照平均OD值須在0．20—0．65。
3．弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時，本試驗結果可信，否則重復實驗。
4．若待測標本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性，反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10％范圍內再測1次，如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。