丙二醛（malondialdehyde）含量試劑盒說明書

【資料簡介】

丙二醛(malondialdehyde)含量試劑盒說明書For Research Use only
僅供研究用
貨號：QYS-23035
微量法 100 管/96 樣
丙二醛(malondialdehyde)含量試劑盒說明書正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。
測定原理：

MDA 與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產物，在 532nm 有zui大吸收峰，進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定 600nm 下的吸光度，利用 532nm 與 600nm 下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。
需自備的儀器和用品：

丙二醛(malondialdehyde)含量試劑盒說明書可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配置：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；
注意事項：

臨用前注意試劑一是否*溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加熱，并振蕩以促進溶解。

MDA 提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。2、血清（漿）樣品：直接檢測。
丙二醛(malondialdehyde)含量試劑盒說明書測定步驟：

1、吸取 0.3mL 試劑一于 1.5mL 離心管中，再加入 0.1mL 樣本, 混勻。
2、95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心10min。

3、吸取 200μL 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中，測定 532nm 和 600nm 處的吸光度，記為 A532 和 A600，ΔA= A532-A600。
MDA 含量計算： 
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）中 MDA 含量的計算：

MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=25.8×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算
（1）按照蛋白濃度計算

MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=25.8× ΔA ÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
（2）按照樣品質量計算

MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)=25.8×ΔA ÷W

(3 ) 按照細菌或細胞密度計算：

MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.0516×ΔA

V 反總：反應體系總體積， 4×10-4 L；ε：丙二醛摩爾消光系數，155×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清（漿）中 MDA 含量的計算：

MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣=51.6×ΔA

2、細菌、細胞或動物組織中 MDA 含量計算（1）按照蛋白濃度計算

MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣)=51.6×ΔA÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。（2）按照樣品質量計算

MDA 含量(nmol/g 鮮重)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)=51.6×ΔA÷W

(3 ) 按照細菌或細胞密度計算：

MDA 含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)=0.1032×ΔA

V 反總：反應體系總體積，4×10-4 L；ε：丙二醛摩爾消光系數，155×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.1 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500 萬。