游離脂肪酸（free fattyacid，FFA）含量測定試劑盒說明書

【資料簡介】

游離脂肪酸（free fattyacid，FFA）含量測定試劑盒說明書
測定意義：
FFA既是脂肪水解的產物，又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類代謝、糖代謝、內分泌 功
能有關，也可反映食物貯藏中的品質變化。
測定原理：
在弱酸性條件下，FFA 與銅鹽反應生成銅皂，在 715nm 處有特征吸收峰，在一定范圍內游
離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關系。
自備儀器和用品： 研缽、臺式離心機、可見分光光度
計、1mL 玻璃比色皿。 試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1 瓶，4℃保存。
樣品中 FFA 提取：
1、 血液：將所取血液，室溫靜置1 h 后，于4 ℃ 離心機 3500 rpm離心 15min，取上清0.1mL，
加 1.2mL 試劑一，震蕩提取 3h，8000rpm，4℃離心 10min，取上清液待測。
2、 組織：組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后稱取約 0.1g 轉移至離
心管，按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：12 的比例加入試劑一，震蕩提取 3h，
8000rpm，4℃離心 10min，取上清液待測。
3、 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1.2 的比例（建
議 500 萬細胞加入 1.2mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超
聲 2 秒，間隔 3 秒，總時間 3min）；震蕩提取3h，然后 8000rpm，4℃，離心 10min，取
上清待測。
測定操作：
1. 分光光度計預熱 30 min 以上，調節波長到 715 nm。
2. 對照管：取上清液 1mL，加 0.5mL 試劑二，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿，調零。
3. 測定管：取上清液 1mL，加 0.5mL 試劑三，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8mL
于 1mL 玻璃比色皿，測定吸光值，記為 A。
記為 A 測定管。
FFA 含量計算：
標準曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R 2 =0.994
1. 血液中 FFA含量計算
FFA（μmol/L）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷V 樣=1333×(A-0.0055)
2. 組織中 FFA含量計算
（1）按樣本蛋白濃度計算
FFA（μmol/mg prot）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣×Cpr)= 0.133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按樣本質量計算
FFA（μmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)= 0.16×(A-0.0055)÷W
3. 按細胞數量計算
FFA（μmol/10 4 cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量)
= 0.16×(A-0.0055)÷細胞數量
V 樣總：上清液總體積，1.2 mL；V 反總：反應總體積，1mL；V 樣：加入樣本體積，1mL；
W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL