海藻糖含量試劑盒說明書

【資料簡介】

海藻糖含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

海藻糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。由于海藻糖具有*的不同于其他碳

水化合物的生物學特性，能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質等惡劣環境下

保護生物體細胞蛋白質、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。

測定原理：

蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用于微量樣品的測定等優點。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿﹑研缽、濃硫酸（不允許快遞）

和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50ml×1 瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；

海藻糖提取：

1、細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104

個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），

超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3S，間隔 10S，重復 30 次），室

溫靜置 45min，振蕩 3~5 次，冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清。

2、組織的處理：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g

組織，加入 1mL 提取液），冰浴勻漿，室溫靜置 45min，振蕩 3~5 次，冷卻后，8000g，25℃

離心 10min，取上清。

3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建

議取 0.1mL 血清（漿）加入 1mL 提取液），冰浴勻漿，室溫靜置 45min，振蕩 3~5 次，冷卻

后，8000g，25℃離心 10min，取上清。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 620nm，蒸餾水調零。

2、 調節水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制：臨用前在試劑一中加入 7.5mL 蒸餾水后，緩慢加入 42.5mL 濃硫酸，不

斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；

4、樣本測定：取 0.25mL 樣本和 1mL 工作液至 EP 管中，95 度水浴 10 min（蓋緊，防止水

分散失），自然冷卻至室溫，在 620 nm 波長下記錄測定吸光度值 A。

注意：由于工作液具有強腐蝕性，請謹慎操作。

若吸光值大于1，請將樣本用提取液稀釋后再測定，計算公式中乘以相應的稀釋倍數。海藻糖含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為 y = 8.8976x+0.0729；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

海藻糖含量(mg/g 鮮重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計算：

海藻糖含量(mg/mg prot)=[ V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。

4、按細菌或細胞密度計算：

海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A

-0.0729)

5、血清（漿）海藻糖含量計算

海藻糖含量（mg/mL）＝[V1×(A -0.0729）÷8.8976 )]÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)

1000：1mg/mL=1000µg/mL；V1：加入反應體系中樣本體積，0.25 mL；V2：加入提取液總

體積 1mL；V3：加入血清（漿體積），0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質

量，g；500：細菌或細胞總數，500 萬。

注意：zui低檢測限為 10μg/g 鮮重或 0.1μg/ mg prot