熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgG相關(guān)知識

【資料簡介】

熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgG相關(guān)知識

加一抗與抗原結(jié)合
①將加樣槽洗滌干凈，將膜用一次性手套覆蓋好，按標記和實驗設計切下膜條并作好記號，按順序置于加樣槽中加入相應的一抗約1ml，注意保證膜的所有部分同溶液接觸。
②室溫下于搖床孵育2h或4℃過夜。
③棄去一抗，膜條仍置于加樣槽，每個槽中的膜用PBST在搖床洗滌洗滌5min左右 ，換液，反復4-5次。

加二抗與一抗的結(jié)合
① 根據(jù)實驗需要和設計選擇合適的酶標二抗和稀釋濃度（PBS稀釋），每個加樣槽中加入二抗1ml左右室溫下于搖床孵育1h，注意保證膜的所有部分同溶液接觸。
②棄去二抗，膜條仍置于加樣槽，每個槽加PBST在搖床洗滌洗滌5min左右，換液反復4-5次。

顯色反應（重組蛋白一般用AP顯色或是DAB顯色，裂解液一般用發(fā)光法）
① HRP標記二抗用DAB顯色，按順序依次將DAB三種劑各取3滴于5ml蒸餾水中，避光混勻，將膜加入顯色液中避光顯色5-15min終止反應，對照Marker記錄實驗結(jié)果，將NC膜晾干掃描保存
②        AKP標記二抗用AP顯色，在10mlAKP緩沖液中加入66µlNBT溶液和33µl BCIP溶液混勻，室溫下將膜放入顯色（37℃可加速反應）5-15min。對照Marker記錄實驗結(jié)果，將NC膜晾干掃描保存。
③底物發(fā)光法：將兩種顯色底物1：1等體積混合后將其覆蓋在膜表面使其均勻，用玻璃膠片把膜包起來，馬上在暗室中將X光片覆蓋在膜的上面（時間根據(jù)光的亮度來衡量），顯影、定影。（熒光在一段時間后會越來越弱要控制好時間）

Anti-VEGF-A/FITC  熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgG

Anti-VEGF-B/FITC  熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子B抗體IgG

Anti-VEGF-C/FITC  熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子C型抗體IgG

Anti-VEGF/RBITC  羅丹明標記VEGF抗體IgG

Mouse Anti-human VEGF/FITC  熒光素標記小鼠抗人VEGF單克隆抗體IgG

Anti-VEGFR1/VEGF-R1/Flt-1 /FITC  熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體IgG

Anti-VEGFR2（VEGF-R2）Flk1/FITC  熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體IgG

Anti-SV2A/FITC  熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG

Anti-sVEGFR2/sFLK-1/FITC  熒光素標記可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體（人）IgG

Anti-VEGFR-3/FLt-4 /FITC  熒光素標記血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3IgG

Anti-HSP-70/RBITC  羅丹明標記熱休克蛋白-70抗體IgG

Anti-VHL/FITC  熒光素標記一種腫瘤抑制因子抗體IgG

Anti-Vimentin/FITC  熒光素標記波形蛋白抗體IgG

Anti-VIP/FITC  熒光素標記血管活性腸肽抗體蛋白抗體IgG

Anti-Visfatin-1/PBEF1（NT）/FITC  熒光素標記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素/腹脂素/內(nèi)肥素 抗體IgG

Anti-Visfatin-1/PBEF1（NT） hu、 mo、 rat、MK /FITC  熒光素標記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（N端抗體）IgG

Anti-Visfatin-1/PBEF1（NT） Human /FITC  熒光素標記內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（N端抗體）IgG